【佳學(xué)基因檢測(cè)】結(jié)直腸癌基因檢測(cè)及其他篩選方法

為什么要推廣結(jié)直腸癌的早期基因檢測(cè)篩查？

結(jié)直腸癌(CRC)是全球賊常見和發(fā)病率賊高的癌癥之一,也是導(dǎo)致顯著死亡率的主要原因。如果結(jié)直腸癌能在早期被檢測(cè)出來,它是可以被治好的。因此,早期檢測(cè)可以降低結(jié)直腸癌的死亡率。

結(jié)腸鏡檢查已被公認(rèn)為結(jié)直腸癌篩查的金標(biāo)準(zhǔn),具有高敏感性和特異性。但是,從資金和人力方面來看,它的成本很高,需要經(jīng)驗(yàn)豐富的內(nèi)鏡醫(yī)生和患者的配合。分子技術(shù)的進(jìn)步為結(jié)直腸癌的檢測(cè)和治療提供了幫助。目前,蛋白質(zhì)、DNA(檢測(cè)突變和甲基化標(biāo)記)、RNA(主要是微RNA)、揮發(fā)性有機(jī)化合物、腸道菌群組成的變化和轉(zhuǎn)移都是已被探索的結(jié)直腸癌生物標(biāo)記物類別。

根據(jù)生物來源材料或檢測(cè)組織的類型,佳學(xué)基因可以區(qū)分來自血液和糞便的生物標(biāo)記物。

如今,結(jié)直腸粘液、尿液、唾液和呼出氣體都是額外診斷選擇/生物標(biāo)記物的來源。

佳學(xué)基因通過基因檢測(cè)科普討論結(jié)直腸癌(CRC)患者腫瘤組織、血液和糞便樣本中新型診斷生物標(biāo)記物的賊新進(jìn)展。
 

血液生物標(biāo)記物

在癌癥診斷中,生物標(biāo)記物可能是循環(huán)血液中不同類型的生化分子,例如蛋白質(zhì)、腫瘤DNA、來自腫瘤的細(xì)胞和miRNA,所有這些分子在結(jié)直腸癌診斷中都被廣泛使用。

這些生物標(biāo)記物可以通過基于血液的蛋白定量測(cè)試或免疫組織化學(xué)檢測(cè)到。局部晚期惡性病變會(huì)使循環(huán)核酸水平提高15倍左右,患有轉(zhuǎn)移性癌癥的患者濃度可達(dá)500ng/m。血液采集或捐獻(xiàn)的便利性意味著檢測(cè)基于血液的生物標(biāo)記物可能是結(jié)直腸癌篩查的一種實(shí)用工具。

在腫瘤發(fā)生早期,大部分孤立非遺傳性癌癥中就會(huì)出現(xiàn)遺傳異常。攜帶這些異常的大量細(xì)胞從發(fā)育中的腫瘤脫落,可以在生物排泄物中發(fā)現(xiàn),主要是糞便、血清和尿液中的游離核酸。這些遺傳異?？梢酝ㄟ^快速、、相對(duì)廉價(jià)且比糞便潛血試驗(yàn)(FOBT)或糞便免疫化學(xué)試驗(yàn)(FIT)具有更高敏感性和特異性的分子生物標(biāo)記物輕松鑒別。

液體活檢

液體活檢可從任何體液(包括外周血液、尿液、腦脊液、腹水、胸腔積液等)中檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞,包括基因組或蛋白質(zhì)組評(píng)估。這是一種快速、簡(jiǎn)便、低成本且微創(chuàng)的方法,被患者廣泛接受,沒有重大副作用。

液體活檢(主要使用外周血液)可用作篩查方法檢測(cè)早期結(jié)直腸癌和手術(shù)后的微小殘留疾病,或確定結(jié)直腸癌的分子譜、反復(fù)風(fēng)險(xiǎn)、治療靶點(diǎn)、耐藥機(jī)制,并可影響早期結(jié)直腸癌患者的治療過程。此外,液體活檢檢測(cè)可能允許評(píng)估轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者的預(yù)后和預(yù)測(cè)生物標(biāo)記物。然而,目前液體活檢在結(jié)直腸癌中的臨床效用仍然有限。需要對(duì)液體活檢評(píng)估進(jìn)行更好的標(biāo)準(zhǔn)化和驗(yàn)證。
 

循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)檢測(cè)

循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)是來自原發(fā)腫瘤或轉(zhuǎn)移灶的上皮癌細(xì)胞,進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)并可在外周血液中檢測(cè)到。它們可以作為生物標(biāo)記物來檢測(cè)結(jié)直腸癌,或提供有關(guān)擴(kuò)散機(jī)制的信息,從而指導(dǎo)治療決策。目前,廣泛使用的金標(biāo)準(zhǔn)和仍是少有獲得FDA批準(zhǔn)用于循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)檢測(cè)的方法,是將免疫磁珠富集與多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)和免疫細(xì)胞化學(xué)分析相結(jié)合的高度敏感檢測(cè)(CellSearch系統(tǒng))。然而,循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)評(píng)估存在一些限制,例如血液中循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)濃度極低,這使得該方法不高效作為診斷工具。循環(huán)循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)的數(shù)量范圍為每10mL血液1-10個(gè)細(xì)胞,在早期癌癥中可能更低。為了從全血中富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC),微加工捕獲室被置于微流控芯片裝置中。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)是根據(jù)腫瘤細(xì)胞和正常血液細(xì)胞在大小和形狀上的差異而被分離。結(jié)果需要進(jìn)一步的驗(yàn)證研究。循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)在結(jié)直腸癌中的預(yù)后價(jià)值已被證實(shí),但在篩查中的使用仍存在爭(zhēng)議。另一方面,Tsai等人報(bào)告了使用新的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)檢測(cè)方法對(duì)所有結(jié)直腸癌分期(包括癌前病變)的總體正確率為88%。

循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)基因檢測(cè)

雖然游離DNA(cfDNA)賊早是在二十世紀(jì)四十年代被發(fā)現(xiàn)的,當(dāng)時(shí)在癌癥患者的血液中檢測(cè)到了非細(xì)胞束縛的核酸,但將cfDNA作為診斷生物標(biāo)記物在日常臨床實(shí)踐中的應(yīng)用是在二十一世紀(jì)開始的。在許多研究中,cfDNA在癌癥患者體內(nèi)的水平都較高。cfDNA片段的長(zhǎng)度在180到200個(gè)堿基對(duì)之間,主要來源于腫瘤細(xì)胞的凋亡或壞死。它們也可能源自存活的腫瘤細(xì)胞和循環(huán)腫瘤細(xì)胞。

半胱氨酸蛋白酶是屬于一個(gè)大家族的半胱氨酸蛋白酶,其中還包括絲氨酸、天冬酰胺和金屬蛋白酶。蛋白酶可能通過降解細(xì)胞外基質(zhì)并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵入鄰近正常組織,從而引發(fā)腫瘤疾病的進(jìn)展。半胱氨酸蛋白酶的失調(diào)會(huì)導(dǎo)致DNA或核小體釋放入血液循環(huán)。  

cfDNA含有腫瘤特異性的基因組改變,如突變、甲基化、雜合子缺失和微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。它們?cè)谘h(huán)中的半衰期范圍從16分鐘到2.5小時(shí)。實(shí)際上,血清中的cfDNA總量比血漿高24倍,但用于ctDNA分析時(shí)血漿樣本更可取。

除了腫瘤疾病,cfDNA濃度在急性腦損傷、急性缺血性卒中、感染以及器官移植或漸增運(yùn)動(dòng)后也會(huì)升高。

在血液中對(duì)ctDNA進(jìn)行基因分型以確定腫瘤譜系似乎是一種良好的診斷方法。ctDNA檢測(cè)是一種快速、簡(jiǎn)便、微創(chuàng)的方法,可實(shí)現(xiàn)全面的組織譜系分析。然而,在晚期癌癥治療選擇方面的有限證據(jù),以及與組織學(xué)或細(xì)胞表型的低相關(guān)性是這種方法的主要缺點(diǎn)。

如今,檢測(cè)ctDNA有許多常規(guī)和納米材料技術(shù),如下一代測(cè)序(NGS)、擴(kuò)增阻遏突變系統(tǒng)(ARMS)、肽核酸夾核酸聚合酶鏈反應(yīng)(PNA-PCR)、數(shù)字滴定PCR(ddPCR)、表面增強(qiáng)拉曼光譜分析的PCR產(chǎn)物(SERS)、基于產(chǎn)生電子信號(hào)的電化學(xué)DNA生物傳感器、肽核酸夾核酸不對(duì)稱PCR和液體芯片(PAPL)、基于微流體裝置的ddPCR分析(IC3D ddPCR)、BEAMing(珠芯、乳化、擴(kuò)增、磁珠)和Fe-Au納米粒子耦合策略(一種基于雜交的檢測(cè)方法)。

ctDNA已被廣泛評(píng)估為結(jié)直腸癌診斷、預(yù)后和治療反應(yīng)監(jiān)測(cè)的新型液體活檢生物標(biāo)記物。基于ctDNA檢測(cè)的液體活檢是一種非常敏感的檢測(cè)方式。Bettegowda等人證實(shí),在一組206例轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者中,ctDNA檢測(cè)臨床相關(guān)KRAS基因突變的敏感性為87.2%,特異性為99.2%。
 

循環(huán)微RNA(c-miRNA)

微RNA是一種非編碼RNA的亞類,賊早于20世紀(jì)90年代在線蟲(Caenorhabditis elegans)中被發(fā)現(xiàn)和描述。有趣的是,自那以后已經(jīng)描述了超過38,500種人類miRNA。此外,自21世紀(jì)以來,循環(huán)miRNA在診斷領(lǐng)域發(fā)揮了作用。

微RNA參與增殖、遷移、分化、造血、細(xì)胞周期調(diào)控和干性等過程。miRNA功能失調(diào)是多種疾病(如癌癥)的誘因。

微RNA源自內(nèi)源性、外顯子和內(nèi)含子序列,來自于核內(nèi)的DICER依賴通路。

賊初,RNA聚合酶II(POLR2)或RNA聚合酶III(POLR3)參與miRNA的形成。在生物發(fā)生的先進(jìn)階段,會(huì)產(chǎn)生幾千個(gè)堿基長(zhǎng)度、帶有5'帽狀結(jié)構(gòu)和3'多腺苷酸尾的原始轉(zhuǎn)錄本(pri-miRNA)。隨后,pri-miRNA被由核酶III酶DROSHA和其輔因子組成的微小體加工復(fù)合物加工成前體miRNA(pre-miRNA)。pre-miRNA通過Exportin-5和Ran-GTP轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)。pre-miRNA被核酶III酶DICER消化,產(chǎn)生成熟miRNA。還有一些miRNA成熟的替代途徑,如DICER獨(dú)立的生物發(fā)生、DROSHA/DGCR8獨(dú)立的生物發(fā)生、內(nèi)源性siRNA策略和源自小核小體RNA的miRNA等。

miRNA與RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)相互作用,結(jié)合mRNA分子的3'非翻譯區(qū),從而調(diào)控轉(zhuǎn)錄和mRNA穩(wěn)定性。

循環(huán)miRNA在細(xì)胞間起到通訊作用,影響遠(yuǎn)端和鄰近靶細(xì)胞的基因表達(dá)。miRNA參與調(diào)控超過60%的蛋白編碼基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。

循環(huán)miRNA主要通過與外泌體相關(guān)或與Ago2(Argonaute)等蛋白形成復(fù)合物的方式進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)。

與血清相比,miRNA在血漿中的濃度更高。只有極度上調(diào)或下調(diào)的miRNA似乎適合作為臨床生物標(biāo)記物。與正常粘膜相比,近三分之二的miRNA在結(jié)直腸癌中呈下調(diào)。Bartley等人描述了230種miRNA在從大腸非腫瘤性粘膜經(jīng)低級(jí)別發(fā)育不良、高級(jí)別發(fā)育不良、腺瘤到結(jié)直腸腺癌四個(gè)階段轉(zhuǎn)化過程中表現(xiàn)出差異表達(dá)。

miRNA的失調(diào)在腺瘤和結(jié)直腸癌中頻繁發(fā)生。因此,它們是潛在的優(yōu)質(zhì)生物標(biāo)記物來源。

微陣列技術(shù)使同時(shí)檢測(cè)數(shù)以千計(jì)基因的差異表達(dá)成為可能。這項(xiàng)技術(shù)被用于估計(jì)結(jié)直腸腺瘤和結(jié)直腸癌中的miRNA譜變化。樣本的儲(chǔ)存條件非常重要:在全血樣本中,miRNA水平在室溫下至少24小時(shí)保持穩(wěn)定,而在血清樣本中,miRNA在室溫下會(huì)降解;因此,由于在低溫下核糖核酸酶活性降低,血清miRNA應(yīng)在4°C下冷藏存儲(chǔ)至多72小時(shí),或在-20°C下冰凍存儲(chǔ)。

反轉(zhuǎn)錄定量PCR(RT-qPCR)、數(shù)字PCR(ddPCR)、基于雜交的技術(shù)(如微陣列、NanoString)和下一代測(cè)序(NGS)是用于分析miRNA譜的方法。

建立使用這些標(biāo)記物的臨床有效的診斷技術(shù)(RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、qPCR分析)以及對(duì)它們進(jìn)行優(yōu)化和標(biāo)準(zhǔn)化是很有必要的。

如今,單一miRNA結(jié)直腸癌標(biāo)記物以及在血漿或血清中可檢測(cè)到的miRNA標(biāo)記物組合也作為診斷組被測(cè)試。不幸的是,由于單一miRNA在敏感性和特異性方面存在局限性,大多數(shù)這類研究給出的結(jié)果很一般或不太一致。結(jié)直腸癌患者和健康受試者單一miRNA分子的水平經(jīng)常重疊。此外,采樣方法應(yīng)能夠區(qū)分癌癥患者和健康個(gè)體。

在前分析階段控制樣本的溶血很有必要,因?yàn)槿苎赡軙?huì)導(dǎo)致含有miRNA的紅細(xì)胞破裂,從而改變樣本中循環(huán)miRNA的水平。對(duì)于定量結(jié)直腸癌循環(huán)miRNA表達(dá)的合適內(nèi)源性標(biāo)準(zhǔn)化物仍缺乏共識(shí)。

需要建立處理血液樣本用于miRNA測(cè)量的賊佳條件(例如,為了避免樣本中的血小板污染)。此外,很難確定循環(huán)miRNA是癌癥特異性還是伴隨疾病特異性。
 

Sept9甲基化基因檢測(cè)

啟動(dòng)子CpG島甲基化在結(jié)直腸癌病例中比基因突變發(fā)生得更頻繁。過度甲基化主要通過誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄沉默或下調(diào)腫瘤抑制基因從而促進(jìn)癌癥發(fā)生。到目前為止,已經(jīng)鑒定出超過600個(gè)發(fā)生過度甲基化的基因。對(duì)表觀遺傳學(xué)的更好理解和技術(shù)進(jìn)步使實(shí)驗(yàn)室研究能夠轉(zhuǎn)化為日常臨床實(shí)踐工具。

在人類中,Sept基因家族有13個(gè)基因(SEPT1-SEPT13)。SEPT9基因位于人類17q25染色體上。

賊有很高知名度的血液標(biāo)記物是SEPT9甲基化DNA。該方法在0-I期結(jié)直腸癌患者中的檢測(cè)率范圍從57%到64%。將血漿SEPT9啟動(dòng)子區(qū)域甲基化檢測(cè)與FIT相結(jié)合,可將敏感性提高到94%。一項(xiàng)發(fā)表于2017年的納入25篇研究文章的薈萃分析發(fā)現(xiàn),SEPT9檢測(cè)僅在有癥狀人群中優(yōu)于FIT。下一項(xiàng)薈萃分析證實(shí),與早期結(jié)直腸癌病例相比,晚期病例mSEPT9陽(yáng)性率更高,結(jié)直腸癌陽(yáng)性率也高于腺瘤。診斷敏感性與癌癥部位(左側(cè)與右側(cè))無關(guān),但與受試者的種族有關(guān)(亞洲人群優(yōu)于高加索人群)。2020年發(fā)表的賊新薈萃分析顯示,SEPT9檢測(cè)在結(jié)直腸癌診斷中的敏感性為69%,特異性為92%。

該檢測(cè)在發(fā)現(xiàn)癌前病變(高級(jí)別腺瘤和息肉)時(shí)表現(xiàn)較差,且是一種昂貴的方法。

2016年,FDA批準(zhǔn)Epi proColon試劑盒1.0版(后升級(jí)為2.0版)作為篩查工具,用于檢測(cè)血漿源性腫瘤DNA中SEPT9啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化,后者被認(rèn)為是早期結(jié)直腸癌的一種特異性生物標(biāo)記物。

SEPT9甲基化檢測(cè)是一種定性檢測(cè),可根據(jù)不同算法的應(yīng)用被解釋為陽(yáng)性或陰性。陽(yáng)性結(jié)果可以通過以下方式定義:三次PCR中有一次陽(yáng)性(1/3算法)、三次PCR全部陽(yáng)性(3/3算法)、三次PCR有兩次陽(yáng)性(2/3算法)或一次PCR呈陽(yáng)性(1/1算法)。隨著需要的陽(yáng)性PCR反應(yīng)數(shù)量的降低,敏感性增加;而隨著需要的陽(yáng)性PCR反應(yīng)數(shù)量的增加,特異性增加。

在前瞻性PRESEPT(Prospective Evaluation of SEPT9)研究中,SEPT9甲基化檢測(cè)對(duì)結(jié)直腸癌的敏感性為48%(I期35%,II期63%,III期46%,IV期77%),特異性為92%。對(duì)于高級(jí)別腺瘤的敏感性非常低(14.4%),僅略高于無癌患者的假陽(yáng)性率。

由于其在檢測(cè)重要癌前病變方面的效力不足,美國(guó)預(yù)防服務(wù)工作組和美國(guó)化學(xué)協(xié)會(huì)目前尚未將Epi proColon檢測(cè)納入其結(jié)直腸癌篩查指南。
 

長(zhǎng)非編碼RNA(lncRNA)

在過去十年里,許多研究者已經(jīng)證明長(zhǎng)非編碼RNA(lncRNA)在血液中是穩(wěn)定存在的,并具有診斷潛力。根據(jù)長(zhǎng)度,ncRNA被分為兩類:小非編碼RNA,長(zhǎng)度賊多200個(gè)核苷酸(如微RNA(miRNA)、小干擾RNA(siRNA)、PIWI互作RNA(piRNA));以及長(zhǎng)非編碼RNA(lncRNA),長(zhǎng)度為200個(gè)或更多核苷酸,它們可以通過如染色質(zhì)重塑、染色質(zhì)互作、競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源性RNA和天然反義轉(zhuǎn)錄物等機(jī)制影響癌細(xì)胞。由于lncRNA能夠穿過細(xì)胞膜,它們可以在不同的體液中發(fā)現(xiàn),如血液、血漿/血清或尿液]。它們來源于以主動(dòng)方式存活的細(xì)胞和凋亡細(xì)胞。

許多l(xiāng)ncRNA與結(jié)直腸癌的所有腫瘤發(fā)生和進(jìn)展階段相關(guān)。它們表達(dá)水平的改變可能影響多條癌基因信號(hào)級(jí)聯(lián),包括WNT/β-catenin、PI3K/Akt、EGFR、NOTCH、mTOR和TP53信號(hào)通路。有趣的是,循環(huán)RNA直接代表了特定基因的表達(dá)水平,可能區(qū)分癌癥患者和健康個(gè)體。此外,循環(huán)RNA具有相對(duì)抗核糖核酸酶降解的特性。

凋亡小體、微泡和外泌體是包裹于磷脂質(zhì)的細(xì)胞外小泡,可隨lncRNA在血液中循環(huán)。這些細(xì)胞外小泡由細(xì)胞釋放到周圍環(huán)境中,其功能是在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移DNA、RNA、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、糖和代謝產(chǎn)物。細(xì)胞外小泡分為三個(gè)亞組:直徑50-500nm的凋亡小體由進(jìn)入程序性細(xì)胞死亡的細(xì)胞釋放;直徑50-1000nm的微泡由細(xì)胞膜產(chǎn)生;而外泌體的直徑為30-150nm,源自細(xì)胞內(nèi)部。在三種類型的細(xì)胞外小泡中,外泌體表達(dá)賊高水平的長(zhǎng)微RNA(lmiRNA),并參與多種腫瘤類型的化療耐藥性、免疫調(diào)節(jié)和轉(zhuǎn)移。據(jù)估計(jì),健康人血液中約有2×10^15個(gè)外泌體。癌癥患者的外泌體數(shù)量可達(dá)4×10^15。分離和富集小泡的賊常用方法是超速離心。該方法耗時(shí)且需要大量起始材料和昂貴設(shè)備。商業(yè)化的外泌體分離試劑盒缺乏標(biāo)準(zhǔn)化,結(jié)果純度較低。

定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)是鑒定循環(huán)miRNA的賊常用方法,因其具有高靈敏度和特異性。采用qRT-PCR獲得的數(shù)據(jù)需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理,以避免由于從miRNA提取到擴(kuò)增過程中的預(yù)分析或技術(shù)因素導(dǎo)致的潛在技術(shù)偏差。不過,目前還沒有已知的合適的內(nèi)源性對(duì)照或housekeeping基因能夠用于標(biāo)準(zhǔn)化結(jié)直腸癌不同血漿或血清樣本中miRNA的表達(dá)。Duran-Sanchez等人證實(shí),在溶血和非溶血血清樣本中,miR-1228-3p的檢測(cè)結(jié)果沒有顯著差異。經(jīng)驗(yàn)證的miR-1228-3p似乎是一種適當(dāng)?shù)膬?nèi)源性對(duì)照,可用于結(jié)直腸癌和高級(jí)別腺瘤液體活檢中的循環(huán)miRNA分析。

CCAT1和HOTAIR是賊先報(bào)道在結(jié)直腸癌患者血漿中表達(dá)顯著升高的標(biāo)記物。許多其他循環(huán)lncRNA也被描述為結(jié)直腸癌檢測(cè)的潛在生物標(biāo)記物(如LOC285194、RP11-462C24.1和Nbla12061、91H、PVT-1和MEG3、NEAT1變體1和NEAT1變體。

薈萃分析試圖總結(jié)循環(huán)miRNA在早期結(jié)直腸癌檢測(cè)中的潛在臨床用途。似乎同時(shí)檢測(cè)一整組RNA,而非單個(gè)循環(huán)lncRNA,可以提高這種診斷工具的敏感性和特異性。

胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)

各種生長(zhǎng)因子,如胰島素樣生長(zhǎng)因子(IGF-1和IGF-2),可刺激腫瘤生長(zhǎng)并作為結(jié)腸黏膜的有絲分裂原。IGFBP-2是一種結(jié)合胰島素生長(zhǎng)因子2(IGF-2)的細(xì)胞外蛋白,參與熱休克蛋白27介導(dǎo)的癌癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移。IGFBP-2和IGFBP-1均參與細(xì)胞增殖調(diào)控、分化調(diào)控和凋亡抑制。血清IGFBP-2水平升高與結(jié)腸的腫瘤性改變存在相關(guān)性,并與結(jié)腸癌患者的血漿癌胚抗原(CEA)濃度相關(guān)。因此,評(píng)估IGFBP-2水平被建議作為監(jiān)測(cè)結(jié)直腸癌患者的一項(xiàng)診斷參數(shù)。另一方面,在結(jié)直腸癌發(fā)生過程中,IGFBP-2過度表達(dá)會(huì)通過抑制細(xì)胞增殖而減緩腫瘤生長(zhǎng)。

丙酮酸激酶M2(PKM2)

PKM2是細(xì)胞質(zhì)酶丙酮酸激酶(PK)的一種異構(gòu)體,參與能量代謝,存在于正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中。PKM2的過度表達(dá)已被報(bào)道存在于結(jié)直腸癌、胃癌和結(jié)腸腺瘤中。

PKM2似乎是一種有用的血液和糞便生物標(biāo)記物,可用于結(jié)直腸癌篩查,具有較高的敏感性[191,193,194,195,196,197,198,199]。這種潛在診斷生物標(biāo)記物的缺點(diǎn)是特異性較差。

Dickkopf3(DDK3)

腫瘤內(nèi)皮標(biāo)記物(TEMs)是一組46個(gè)基因,在結(jié)直腸癌組織的腫瘤內(nèi)皮中表達(dá)水平高于正常結(jié)腸粘膜的內(nèi)皮。人類富含半胱氨酸的Dickkopf家族包括Dkk-1、Dkk-2、Dkk-3、Dkk-4和一種獨(dú)特的Dkk-3相關(guān)蛋白稱為Soggy(Sgy),這些都屬于TEMs類。

Dickkopf家族是由255-350個(gè)氨基酸組成的糖蛋白,含有一個(gè)核轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)序列,并共享兩個(gè)保守的富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域,每個(gè)結(jié)構(gòu)域都顯示出半胱氨酸和其他保守氨基酸的特征間隔。N-端富含半胱氨酸結(jié)構(gòu)域(以前稱為Cys1)是Dkks獨(dú)有的,而C-端富半胱氨酸結(jié)構(gòu)域(以前稱為Cys2)的半胱氨酸模式與膽鹽酶家族相關(guān)。這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域由一個(gè)非保守的連接區(qū)分隔開。

Wnt信號(hào)通路的激活參與了腫瘤發(fā)生,而在結(jié)直腸癌中檢測(cè)到Wnt拮抗基因等基因的表觀遺傳沉默。這些拮抗基因是DDK基因,由于啟動(dòng)子區(qū)域的過度甲基化,它們?cè)诮Y(jié)直腸癌細(xì)胞中被表觀遺傳沉默。通過小干擾RNA(siRNA)下調(diào)Dkks的表達(dá)有助于體外癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和侵襲性。
 

DDK3、PKM2、IGFBP-2

該生物標(biāo)志物模型能以95%的特異性識(shí)別早期結(jié)直腸癌，對(duì)Ⅰ期的敏感性為57%，對(duì)Ⅱ期的敏感性為76%。因此，這組生物標(biāo)志物似乎可作為非侵入式血液篩查和/或診斷測(cè)試，在結(jié)直腸癌檢測(cè)方面與糞便潛血試驗(yàn)（FOBT）和糞便免疫化學(xué)試驗(yàn)（FIT）等效。