【佳學(xué)基因檢測(cè)】高蛋氨酸血癥基因檢測(cè)

阻止遺傳病遺傳基因檢測(cè)導(dǎo)讀 

來(lái)自青島的患兒做了高蛋氨酸血癥基因檢測(cè)?；颊撸?，漢族，入院治療時(shí)為出生后12 天，系第1胎第1產(chǎn)。因新生兒疾病篩查異常提示高蛋氨酸血癥入院?；純河谔g40⁺³周剖宮產(chǎn)出生，出生時(shí)體重4 580 g，身長(zhǎng)52 cm，1分鐘和5分鐘Apgar評(píng)分均為9分，出生情況無(wú)異常。串者母26歲，孕期各項(xiàng)檢查均未發(fā)現(xiàn)異常?；純撼錾? 天后家屬自愿接受新生兒疾病篩查以排除29種遺傳代謝疾病，初步篩查結(jié)果異常。遂將患兒召回行進(jìn)一步檢查并進(jìn)行基因檢測(cè)。

入院體格檢查：患兒吃奶好，無(wú)青紫、氣促，無(wú)驚厥，無(wú)嘔吐、腹脹，大小便正常；神志清，精神反應(yīng)好；口唇紅，面色紅黃，皮膚微黃染，無(wú)皮疹、出血點(diǎn)；全身淋巴結(jié)無(wú)腫大；前囟平軟，大小為1.5 cm；兩側(cè)瞳孔等大等圓，對(duì)光反射靈敏；頸軟，胸廓兩側(cè)對(duì)稱；呼吸45次/min，兩肺呼吸音清；臍帶干燥、未脫；腹軟，肝脾無(wú)腫大，腸鳴音正常；四肢肌張力正常，生理反射正常。

按新生兒疾病篩查常規(guī)，患兒出生后72 h、充分哺乳6次后，足跟采集血斑進(jìn)行新生兒遺傳代謝病篩查。結(jié)果顯示，促甲狀腺激素（TSH）為4.46 U/mL，苯丙氨酸（Phe）為0.807 mg/dL，17α-羥孕酮（17-OHP）為3.38 nmol/L，均未見(jiàn)異常。串聯(lián)質(zhì)譜初次篩查發(fā)現(xiàn)蛋氨酸（Met）為101 µmol/L（參考值：8.0~55.0 µmol/L），Met/Phe比值為2.29（參考值：0.16~1）。于出生后12 d召回重新采集血樣進(jìn)行復(fù)查，結(jié)果顯示Met 152 µmol/L，Met/Phe比值4.48，疑似“高蛋氨酸癥”。血常規(guī)、肝功能未見(jiàn)明顯異常。

基因檢測(cè)分析：在監(jiān)護(hù)人知情同意下采集患兒及患兒父母外周血2 mL，根據(jù)致病基因鑒定基因解碼分析流程文獻(xiàn)方法，對(duì)目的基因（常見(jiàn)的高蛋氨酸癥致病基因MAT1A、GNMT、ADK、AHCY）進(jìn)行擴(kuò)增、文庫(kù)擴(kuò)建、NGS測(cè)序、數(shù)據(jù)分析。賊后對(duì)這些變異位點(diǎn)進(jìn)行功能注釋并通過(guò)Sanger一代測(cè)序驗(yàn)證。經(jīng)基因檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該患兒MAT1A基因存在1個(gè)錯(cuò)義突變：c.791G > A（p.R264H）（圖 1A），為雜合突變，經(jīng)人類基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)（HGMD）查詢，其ID為CM970910，呈顯性遺傳，可導(dǎo)致高甲硫氨酸血癥。其他常見(jiàn)高高蛋氨酸血癥致病基因GNMT、ADK、AHCY經(jīng)測(cè)序檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)可疑致病性突變。對(duì)患兒及其父母進(jìn)行Sanger測(cè)序驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，其父親攜帶了與患兒相同的錯(cuò)義突變（圖 1B），表明患兒突變來(lái)源于其父親。對(duì)其父親做了串聯(lián)質(zhì)譜的檢查，其父串聯(lián)檢測(cè)正常，血漿Met濃度正常（47 µmol/L）。

治療隨訪：按文獻(xiàn)報(bào)道方案，根據(jù)患兒血漿Met濃度確定治療方案（若血漿Met濃度超過(guò)300~350 µmol/L才給予特殊飲食及藥物治療），并常規(guī)隨訪，檢測(cè)血漿Met濃度。本例患兒血漿Met濃度為152 µmol/L，因此未給予特殊飲食治療。患兒1周歲體檢時(shí)體格發(fā)育及智力發(fā)育正常，血漿Met濃度為77 µmol/L，較前幾次檢測(cè)稍有下降。

高蛋氨酸血癥基因檢測(cè)討論

串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)可實(shí)現(xiàn)同時(shí)進(jìn)行數(shù)十種代謝物分析，檢測(cè)出包括氨基酸、有機(jī)酸、脂肪酸氧化代謝紊亂在內(nèi)的多種遺傳代謝性疾病。本例患兒通過(guò)串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)初篩賊終確診為高氨酸血癥。原發(fā)性高蛋氨酸血癥可由導(dǎo)致蛋氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶Ⅰ/Ⅲ缺乏的相關(guān)基因（MAT1A、GNMT、AHCY等）突變引起，這些突變基因有的表現(xiàn)為隱性遺傳，有的表現(xiàn)為顯性遺傳。本例患兒僅檢測(cè)出1個(gè)致病位點(diǎn)（MAT1A基因R264H突變），該突變位點(diǎn)為顯性突變位點(diǎn)。高蛋氨酸血癥的發(fā)現(xiàn)一般都是通過(guò)新生兒串聯(lián)質(zhì)譜篩查提示血片中Met含量異常增高，經(jīng)召回后通過(guò)致病基因鑒定基因解碼確認(rèn)診斷。

高蛋氨酸血癥的報(bào)道甚少，關(guān)于其發(fā)病率也有較大差異。Chien等報(bào)道在1701591位中國(guó)臺(tái)灣人群中確診16例單純型高蛋氨酸血癥，發(fā)病率為1/106349，其中8例為MAT1A基因突變。Couce等報(bào)道西班牙人群中高蛋氨酸血癥發(fā)病率約為1/23469，所報(bào)道的6例患者中5例為MAT1A基因缺陷。Nagao等報(bào)道日本人群發(fā)病率為1/107850。

高蛋氨酸血癥與基因突變導(dǎo)致的遺傳關(guān)系備受關(guān)注，目前已知有6種基因序列突變因素可導(dǎo)致蛋氨酸異常，包括甲硫氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶（MATⅠ/Ⅲ）、胱硫醚合成酶（CBS）、甘氨酸N-甲基轉(zhuǎn)移酶缺陷（GNMT）、S-腺苷高半胱氨酸水解酶、Citrin缺乏癥和延胡索酰乙酰乙酸水解酶（FAH）。其中以MATⅠ與Ⅲ兩種異構(gòu)體缺陷賊為多見(jiàn)，其編碼基因?yàn)镸AT1A，定位于人類10q23.1。高蛋氨酸血癥基因檢測(cè)報(bào)道的這例高蛋氨酸血癥確診患兒即MAT1A基因存在錯(cuò)義突變。迄今為止，國(guó)內(nèi)外已報(bào)道該基因15種突變，大多為錯(cuò)義突變，普遍認(rèn)為突變的方式不僅有地區(qū)、種族的差異，而且與疾病的臨床表現(xiàn)、疾病程度、治療方案都有一定關(guān)系。因此，明確病例基因突變類別極為必要。本例患兒的突變?yōu)镽264H，體外研究發(fā)現(xiàn)第264位氨基酸殘基參與亞單位聚合之間鹽橋的形成，R264H突發(fā)的顯性效應(yīng)是通過(guò)影響R264/R264H二聚體形成從而降低酶的活性。Chien等新穎報(bào)道的中國(guó)臺(tái)灣人群中MAT1A基因以P357L突變賊為多見(jiàn)，3例為R264H突變。隨后更新串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)篩查新確診的11例患兒中5例為R264H突變。Couce等報(bào)道的5例西班牙人群高蛋氨酸血癥均為R264H突變。因此，R264H突變可能是較為常見(jiàn)的突變類型，但中國(guó)大陸尚未有高蛋氨酸血癥R264H突變的報(bào)道。

單純性高蛋氨酸血癥是否應(yīng)當(dāng)常規(guī)進(jìn)行飲食控制治療存在爭(zhēng)議。然而國(guó)內(nèi)外專家普遍認(rèn)為，對(duì)于MAT1A基因缺陷引起的高蛋氨酸血癥一般臨床預(yù)后良好，特別是R264H突變。本例確診患兒未進(jìn)行特殊治療，定期復(fù)查血漿Met水平，目前患兒生長(zhǎng)發(fā)育良好。