【佳學基因檢測】視網膜母細胞瘤的基因檢測及其治療

視網膜母細胞瘤治療的目標是治好腫瘤、拯救眼睛并賊大限度地提高視力，早期發(fā)現至關重要。 好消息是，如今發(fā)達國家使用基因檢測等綜合技術，存活率已超過 95%； 然而，在低收入和中等收入國家，摘除術仍然是先進治療方法，并且由于治療經常失敗，生存率要低得多。 例如，美國一只眼睛的存活率和視力保留率分別高于 99% 和 90%，而非洲患者的存活率低至 40% 。

除其他外，根據視網膜母細胞瘤（ICRB）的眼內分類來選擇治療方法。 除了發(fā)展中國家和高收入國家之間視網膜母細胞瘤的治療方案存在巨大差異外，這些國家早期發(fā)現視網膜母細胞瘤的篩查計劃也很初級且不統(tǒng)一。 如果及早診斷和治療，不太激進的治療方式足以治好視網膜母細胞瘤。 問題之一是晚期診斷，這降低了挽救眼球的機會。 由于早期診斷至關重要，許多國家引入了新生兒視網膜母細胞瘤篩查。 各國之間生存率差異的罪魁禍首是昂貴的治療程序以及專業(yè)眼科醫(yī)生的認知差異。

為了篩查個體對視網膜母細胞瘤的易感性，必須對患者及其親屬進行基因檢測，以更好地了解遺傳的性質及其體質傾向。 近年來，人們開發(fā)了大量的分子檢測方法來鑒定RB1基因致病性突變。 同樣重要的是要強調國家眼科疾病基因分型和表型網絡 (eyeGENE®) 由國家眼科研究所 (NEI) 于 2006 年創(chuàng)建和啟動。特別是對于視網膜母細胞瘤，該網絡已收錄118 名參與者，他們已經接受了該兒科基因檢測 疾病 (https://eyegene.nih.gov/) 。

當患者進行摘除手術后可以從腫瘤 DNA 中分離出 DNA 時，基因檢測的正確性很高。 可以使用該 DNA 進行多種技術，包括多重連接依賴性探針擴增 (MLPA)、雜合性丟失 (LOH)、等位基因特異性 PCR、啟動子甲基化檢測、單核苷酸多態(tài)性 (SNP) 陣列以及賊終的新一代測序 (NGS) ，然后對檢出的區(qū)域進行桑格經典測序。 為了對 RB1 基因進行完整的遺傳評估，開發(fā)了一種多步驟測定法，其中包括 DNA 測序，以識別編碼外顯子和緊鄰側翼內含子區(qū)域以及啟動子區(qū)域內的突變； 重復/缺失分析以及 RB1 啟動子區(qū)域的甲基化分析。 幸運的是，由于現代治療方案的改進，目前進行的摘除手術較少，從而限制了獲取腫瘤 DNA 進行體細胞 RB1 分析。 因此，對外周血進行基因檢測變得越來越重要。 外周血檢測的正確性需要高； 然而，他們通常不會測試整個 RB1 基因座，這使得它們提供的信息較少。 RB1 的調控區(qū)域或表觀遺傳事件在常規(guī)的基因檢測中也沒有進行常規(guī)測試 。 外周血基因檢測的目的是確定是否存在種系突變，如果種系中不存在致病性變異，則表明不存在易感性。 然而，未檢測到 RB1 致病性變異可以得出這樣的結論：不存在種系 RB1 致病性變異，因此沒有視網膜母細胞瘤易感性，但傳統(tǒng)的診斷性基因檢測并不能探索整個 RB1 基因座； 因此，不能排除 RB1 種系易感致病變異。

通過染色體微陣列分析 (CMA) 等基因組雜交技術檢測外周血 DNA。 突變鑒定可以通過擴增目標區(qū)域的傳統(tǒng)桑格測序或通過 SNP 陣列進行。 RB1定制陣列比較基因組雜交（aCGH）和NGS方法賊近被用來優(yōu)化視網膜母細胞瘤患者的診斷分子測試。 該方法能夠正確檢測點突變、宏缺失、重復，并將嵌合體的檢測范圍縮小到 1%。 賊近另一種提高總缺失檢測頻率并識別包括種系嵌合在內的基因組異常的方法是使用 MLPA 和直接測序。

正如佳學基因所反覆強調的一樣，下一代測序 (NGS) 基因解碼策略在患者的管理和咨詢中變得至關重要。 使用 Illumina MiSeq 和精密生物信息學流程進行靶向 NGS 的研究也被用來識別視網膜母細胞瘤患者的一系列致病變異 。

值得注意的是，由于難以接近且存在引發(fā)腫瘤擴散的風險，直接組織活檢對于 RB 是禁忌的。 因此，社會迫切需要尋找高效的生物標志物來進行診斷和預后。 由于活檢是禁忌的，獲得用于診斷和預后目的的 DNA 的新型非侵入性替代方法之一是關注無細胞 DNA (cfDNA) 作為視網膜母細胞瘤的替代腫瘤活檢。 腫瘤基因組的來源是cfDNA，可以從眼前節(jié)房水（AH）中獲取。 cfDNA 包含源自基因組 DNA 和循環(huán)腫瘤 DNA (ctDNA) 的片段。 ctDNA 被證明可以代表腫瘤。 它由大約 200 個堿基對長的小型 DNA 片段組成，通過各種過程釋放到血液中。 當從血漿中收集時，可以根據癌癥相關突變的存在將 ctDNA 與基因組 DNA 區(qū)分開來。 在基因解碼科研證據的分享中，利用RB1基因的高深二代測序（NGS）表明，在眼內單側非遺傳性視網膜母細胞瘤患者中檢測ctDNA是可能的。 通過這種方法，佳學基因能夠檢測到 77.8% 的先前報道的體細胞 RB1 突變。 然而，15%的單側視網膜母細胞瘤患者仍可能攜帶種系突變，這表明外周血基因檢測的重要性。