【佳學(xué)基因-基因檢測】核酸提取技術(shù)簡述（上）

核酸分為脫氧核糖核酸（ＤＮＡ）和核糖核酸（ＲＮＡ），都是極性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑。
 

細(xì)胞裂解

在核酸提取過程中，裂解細(xì)胞是非常重要的。經(jīng)典的試劑則是 SDS、ＥＤＴＡ和鹽 。鹽提供了一個(gè)合適的裂解環(huán)境 ，同時(shí)也抑制樣品中的核酸酶對核酸的破壞 、使核酸結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。通過使蛋白質(zhì)變性，破壞膜結(jié)構(gòu)及解開與核酸相連接的蛋白質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)核酸游離出來。體系中加入蛋白酶Ｋ，是利用蛋白酶將蛋白質(zhì)消化成小的片段，促進(jìn)核酸與蛋白質(zhì)的分開，同時(shí)，也便于后面的純化操作以及獲得純度更高的核酸。
 

裂解細(xì)胞的方法有：機(jī)械方法（超聲波處理法、研磨法、勻漿法）、化學(xué)試劑法（SDS、CTAB、NaOH）、酶解法（溶菌酶或蝸牛酶、蛋白酶K）等。含蛋白酶的裂解方法，可以認(rèn)為是抽提基因組 DNA 的先進(jìn)。裂解包括膜蛋白的游離和與基因組 DNA 相連接的蛋白質(zhì)的游離。蛋白酶的作用是使蛋白質(zhì)變小，故而對蛋白質(zhì)的游離有巨大的促進(jìn)作用；同時(shí)，蛋白質(zhì)被蛋白酶消化變小后，有利于蛋白質(zhì)在純化操作中的去除，使賊終獲得的基因組 DNA 的純度更高。裂解液的用量應(yīng)確保能有效裂解樣品，同時(shí)使裂解體系中核酸的濃度適中。濃度過低，將導(dǎo)致沉淀效率低，影響得率；濃度過高，去除雜質(zhì)的過程復(fù)雜且不有效，導(dǎo)致純度下降。
 

核酸純化

進(jìn)行核酸的純化時(shí)，苯酚/氯仿抽提是經(jīng)典的純化技術(shù)，細(xì)胞裂解后離心分離含核酸的水相，加入等體積的酚∶氯仿∶異戊醇(25 ∶24 ∶1 體積) 混合液。典型的例子是在酚、氯仿抽提后用乙醇沉淀。也可以使用離子交換介質(zhì)和吸附介質(zhì)。

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